Als uiterst nauwkeurig instrument kan HPLC gemakkelijk tot enkele lastige kleine problemen leiden als het tijdens het gebruik niet op de juiste manier wordt gebruikt.Een van de meest voorkomende problemen is het probleem van kolomcompressie.Hoe u snel problemen met een defecte chromatograaf kunt oplossen.Het HPLC-systeem bestaat hoofdzakelijk uit een reservoirfles, een pomp, een injector, een kolom, een kolomtemperatuurkamer, een detector en een gegevensverwerkingssysteem.Voor het hele systeem zijn de pilaren, pompen en detectoren de belangrijkste componenten en de belangrijkste locaties die gevoelig zijn voor problemen.
De sleutel tot kolomdruk is het gebied dat bijzondere aandacht behoeft bij het gebruik van HPLC.De stabiliteit van de kolomdruk hangt nauw samen met de vorm van de chromatografische piek, de kolomefficiëntie, de scheidingsefficiëntie en de retentietijd.Kolomdrukstabiliteit betekent niet dat de drukwaarde stabiel is op een stabiele waarde, maar eerder dat het drukfluctuatiebereik tussen 345 kPa of 50 PSI ligt (waardoor het gebruik van gradiënt-elutie mogelijk is wanneer de kolomdruk stabiel is en langzaam verandert).Een te hoge of te lage druk is een probleem met de kolomdruk.
Het meest vatbaar voor HPLC-fouten en -oplossingen
1. Hoge druk is het meest voorkomende probleem bij het gebruik van HPLC.Dit betekent een plotselinge stijging van de druk.Over het algemeen zijn er de volgende redenen: (1) Over het algemeen is dit te wijten aan verstopping van het stroomkanaal.Op dit punt moeten we het stukje bij beetje onderzoeken.A.Sluit eerst de inlaat van de vacuümpomp af.Op dit punt werd de PEEK-buis gevuld met vloeistof, zodat de PEEK-buis kleiner was dan de fles met oplosmiddel om te zien of de vloeistof naar believen druppelde.Als de vloeistof niet of langzaam druppelt, is de oplosmiddelfilterkop verstopt.Behandeling: Een half uur laten weken in 30% salpeterzuur en afspoelen met ultrapuur water.Als de vloeistof willekeurig druppelt, is de oplosmiddelfilterkop normaal en wordt deze gecontroleerd;B.Open de Purge-klep zodat de mobiele fase niet door de kolom gaat en als de druk niet significant wordt verlaagd, wordt de witte kop van het filter geblokkeerd.Behandeling: Gefilterde whiteheads werden verwijderd en gedurende een half uur gesoniceerd met 10% isopropanol.Ervan uitgaande dat de druk onder de 100PSI daalt, is de gefilterde witte kop normaal en wordt deze gecontroleerd;C.Verwijder het uitlaatuiteinde van de kolom. Als de druk niet afneemt, is de kolom geblokkeerd.Behandeling: Als het een bufferzoutverstopping betreft, spoel dan 95% totdat de druk normaal is.Als de obstructie wordt veroorzaakt door materiaal dat beter geconserveerd is, moet een sterkere stroming dan de huidige mobiele fase worden gebruikt om naar normale druk te haasten.Als de reinigingsdruk op lange termijn niet afneemt volgens de bovenstaande methode, kunnen de inlaat en uitlaat van de kolom integendeel worden beschouwd als verbonden met het instrument en kan de kolom worden gereinigd met de mobiele fase.Als de kolomdruk op dit moment nog steeds niet is verlaagd, kan de zeefplaat bij de ingang van de kolom alleen worden vervangen, maar als de werking eenmaal niet goed is, is het gemakkelijk om het kolomeffect te verminderen, dus probeer minder te gebruiken.Voor moeilijke problemen kan kolomvervanging worden overwogen.
(2) Onjuiste instelling van het debiet: Het juiste debiet kan worden gereset.
(3) Onjuiste stroomverhouding: de viscositeitsindex van verschillende hoeveelheden stromen is verschillend en de overeenkomstige systeemdruk van de stroom met hogere viscositeit is ook groter.Indien mogelijk kunnen oplosmiddelen met een lagere viscositeit worden vervangen of opnieuw worden ingesteld en bereid.
(4) Nulafwijking systeemdruk: pas de nul van de vloeistofniveausensor aan.
2, de druk is te laag (1) wordt meestal veroorzaakt door systeemlekkage.Wat u moet doen: Zoek elke verbinding, vooral de interface aan beide uiteinden van de kolom, en maak het lekgebied vast.Verwijder de paal en draai de PTFE-film met de juiste kracht vast of bekleed deze.
(2) Het gas komt de pomp binnen, maar de druk is op dit moment meestal onstabiel, hoog en laag.Ernstiger is dat de pomp de vloeistof niet kan absorberen.Behandelingsmethode: open de reinigingsklep en reinig met een stroomsnelheid van 3 ~ 5 ml/min.Als dat niet het geval was, werden luchtbellen bij de uitlaatklep afgezogen met behulp van een speciale naaldbuis.
(3) Geen uitstroom van de mobiele fase: controleer of er een mobiele fase in de reservoirfles zit, of de gootsteen in de mobiele fase is ondergedompeld en of de pomp draait.
(4) De referentieklep is niet gesloten: de referentieklep is gesloten na vertraging.Meestal daalt dit naar 0,1.~ 0,2 ml/min na het sluiten van de referentieklep.
Samenvatting:
In dit artikel worden alleen veelvoorkomende problemen bij vloeistofchromatografie geanalyseerd.Natuurlijk zullen we in onze praktische toepassing nog meer andere problemen tegenkomen.Bij het afhandelen van fouten moeten we de volgende principes volgen: verander slechts één factor tegelijk om de relatie tussen de hypothetische factor en het probleem te bepalen;Over het algemeen moeten we er bij het vervangen van onderdelen voor het oplossen van problemen op letten dat de gedemonteerde, intacte onderdelen weer op hun plaats worden geplaatst om verspilling te voorkomen;Het aanleren van een goede recordgewoonte is de sleutel tot het succes van foutafhandeling.Concluderend: bij het gebruik van HPLC is het belangrijk om aandacht te besteden aan de voorbehandeling van monsters en de juiste bediening en onderhoud van de apparatuur.
Posttijd: 18 september 2023