Recombinante eiwitantigenen hebben vaak verschillende epitopen, waarvan sommige sequentie-epitopen zijn en sommige structurele epitopen.Polyklonale antilichamen verkregen door het immuniseren van dieren met gedenatureerde antigenen zijn mengsels van antilichamen die specifiek zijn voor individuele epitopen en kunnen in het algemeen worden gebruikt om natuurlijke structuren of gedenatureerde doeleiwitten te detecteren.Een bijkomend voordeel van het gebruik van gedenatureerde eiwitten als immunogenen is dat gedenatureerde eiwitten doorgaans immunogeen zijn en een sterke immuunrespons bij dieren kunnen stimuleren.
Het expressiesysteem van Escherichia coli wordt meestal gekozen voor antigene doeleinden, omdat dit het duurste systeem is in termen van tijd en geld.Om de mogelijkheid van expressie van het doeleiwit en het gemak van zuivering te verbeteren, wordt soms slechts een klein fragment van het doeleiwit, zoals een specifiek domein, tot expressie gebracht.
De driedimensionale structuur van eiwitten
Het specifieke domein van een eiwit
Als het doel van de antilichaambereiding uitsluitend de detectie van wb is, is het economisch en snel om synthetisch klein peptide als antigeen te gebruiken, maar er bestaat een risico op zwakke immunogeniciteit of niet-reniciteit als gevolg van ongepaste selectie van het peptidesegment.Omdat de bereiding van antilichamen een lange periode vereist, worden vaak twee of drie verschillende peptidesegmenten geselecteerd om antilichamen te bereiden met behulp van polypeptideantigeen om het succespercentage van het experiment te garanderen.
De zuiverheid van het polypeptideantigeen voor immunisatie moet groter zijn dan 80%.Hoewel een hogere zuiverheid theoretisch antilichamen met een betere specificiteit kan opleveren, produceren dieren in de praktijk altijd een groot aantal niet-specifieke antilichamen, waardoor de voordelen van antigeenzuiverheid worden gemaskeerd.
Bovendien moet de bereiding van antilichamen uit kleine peptiden worden verknoopt met het geschikte dragerantigeen om de immunogeniciteit ervan te vergroten.Twee veel voorkomende antigene dragers zijn KLH en BSA.
Posttijd: 23 maart 2023