Bij biologisch onderzoek wordt doorgaans gebruik gemaakt van polypeptiden met een lange sequentie.Voor peptiden met meer dan 60 aminozuren in de sequentie worden doorgaans genexpressie en SDS-PAGE gebruikt om deze te verkrijgen.Deze methode duurt echter lang en het uiteindelijke productscheidingseffect is niet goed.
Uitdagingen en oplossingen voor lange peptidesynthese
Bij de synthese van lange peptiden worden we altijd geconfronteerd met een probleem, dat wil zeggen dat de sterische hindering van de condensatiereactie toeneemt met de toename van de volgorde in de synthese, en de reactietijd moet worden aangepast om de reactie te voltooien.Hoe langer de reactietijd echter is, hoe meer bijwerkingen er optreden en hoe een deel van het doelpeptide wordt gevormd.Dergelijke residuen – deficiënte peptideketens zijn belangrijke onzuiverheden die worden geproduceerd bij lange peptidesynthese.Daarom is het belangrijkste probleem dat we bij de synthese van lange peptiden moeten overwinnen het onderzoeken van de hoogwaardige reactieomstandigheden en reactiemethoden, om de aminozuurcondensatiereactie uitgebreider en vollediger te maken.Verkort bovendien de reactietijd, want hoe langer de reactietijd, hoe meer oncontroleerbare nevenreacties, hoe complexer de bijproducten.Daarom worden de volgende drie punten samengevat:
Microgolfsynthese kan worden gebruikt: Voor sommige aminozuren die bij het syntheseproces voorkomen en die niet gemakkelijk te integreren zijn, kan microgolfsynthese worden gebruikt.Deze methode levert opmerkelijke resultaten op, verkort de reactietijd aanzienlijk en vermindert de vorming van twee belangrijke bijproducten.
Er kan gebruik worden gemaakt van een fragmentsynthesemethode: Wanneer sommige peptiden moeilijk te synthetiseren zijn met gebruikelijke synthesemethoden en niet gemakkelijk te zuiveren zijn, kunnen we de hele condensatie van verschillende aminozuren in een bepaald segment van het peptide overnemen tot de peptideketen als geheel.Deze methode kan ook veel problemen bij de synthese oplossen.
Acylhydrazidesynthese kan worden gebruikt: Acylhydrazidesynthese van peptiden is een methode voor vaste-fasesynthese van N-terminaal Cys-peptide en C-terminaal polypeptidehydrazide, chemische selectieve reactie tussen de vorming van amidebindingen om de peptidebindingsmethode te bereiken.Gebaseerd op de positie van Cys in de peptideketen, verdeelt deze methode de hele peptideketen in meerdere sequenties en synthetiseert deze respectievelijk.Tenslotte wordt het doelpeptide verkregen via condensatiereactie in de vloeistoffase.Deze methode verkort niet alleen de synthesetijd van lange peptiden aanzienlijk, maar verhoogt ook aanzienlijk de zuiverheid van het eindproduct.
Lange peptidezuivering
De bijzonderheid van lange peptiden leidt onvermijdelijk tot complexe componenten van ruwe peptiden.Daarom is het ook een uitdaging om lange peptiden te zuiveren met HPLC.amyloïde reeks van polypeptidezuiveringsproces, veel ervaring geabsorbeerd en met succes gebruikt bij de zuivering van lange peptiden.Door het gebruik van nieuwe apparatuur, het mengen van meerdere zuiveringssystemen, herhaalde scheiding en andere ervaringsmethoden werd het succespercentage van lange peptidezuivering aanzienlijk verbeterd.
Posttijd: 18 april 2023